新冠病毒N蛋白纳米抗体制备及检测卡组装

目的 通过制备新冠病毒N蛋白纳米抗体,将其应用于新冠病毒N蛋白抗原检测.方法 将新冠病毒N蛋白免疫羊驼,构建N蛋白纳米抗体基因文库,通过噬菌体展示技术淘筛对新冠病毒N蛋白具有亲和力的纳米抗体,将纳米抗体基因克隆到酵母载体,挑取阳性克隆菌株诱导表达,亲和层析纯化分泌蛋白,透析脱盐和浓缩后,采用ELISA法筛选对新冠病毒N蛋白高亲和性纳米抗体,交叉配对筛选出1对纳米抗体制备成胶体金免疫层析检测卡,滴加N蛋白溶液到样品孔观察检测线和质控线.结果 共筛选出46株不同序列的纳米抗体,优选其中6株表达、纯化和浓缩得到纳米抗体,抗体浓度＞1.0mg/mL.ELISA筛选结果显示,6株纳米抗体均对N蛋白有高亲和力,抗体配对实验筛选到1对抗体可以夹心法检测新冠病毒N蛋白,组装成胶体金免疫层析检测卡,对新冠病毒N蛋白抗原检测可见明显检测线和质控线条带,检测限≥10 μg/mL.结论 制备的纳米抗体可以用于胶体金纳米抗体免疫层析检测卡,实现对新冠病毒N蛋白的检测.