Effect of Erzhi Pill(二至丸)of Different Dosing Time on the Expression of Biological Clock-related Factors Bmal1 and Cry1 in the Liver Tissue of Aging Liver Injury Model Mice

目的 探讨不同时间给予二至丸对衰老性肝损伤的影响及可能作用机制.方法 60只C57雄性小鼠随机分为正常对照组、模型组、二至丸1:00组、二至丸7:00组、二至丸13:00组、二至丸19:00组,每组10只.除正常对照组外其余各组小鼠每日皮下注射300 mg/kgD-半乳糖诱导衰老性肝损伤模型,共56天.于造模第11天开始,二至丸1:00组、二至丸7:00组、二至丸13:00组、二至丸19:00组分别于1:00、7:00、13:00和19:00给予二至丸2.5 g/kg灌胃,正常对照组和模型组小鼠灌胃给予0.01 ml/g生理盐水,连续46天.检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)和过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;HE染色观察肝组织病理形态变化,Western blot检测小鼠肝组织生物钟相关因子脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1(Bmal1)和隐花色素1(Cry1)蛋白表达水平.结果 与正常对照组相比,模型组小鼠肝组织出现广泛水肿样变,细胞核固缩深染,肝索排列紊乱等,血清ALT、AST、MDA水平显著升高,血清SOD、CAT及肝组织Bmal1、Cry1蛋白水平显著降低(P＜0.01);与模型组相比,二至丸1:00组和二至丸7:00组小鼠肝组织病理学变化均有明显的改善,血清中的ALT、AST、MDA水平显著降低,血清SOD、CAT及肝组织Bmal1、Cry1蛋白水平显著降低(P＜0.05或P＜0.01),二至丸13:00组和二至丸19:00组小鼠肝组织则表现出严重的病理性损伤,血清ALT、AST、SOD、CAT和MDA水平,肝组织Cry1蛋白水平差异无统计学意义(P＞0.05),二至丸19:00组小鼠肝组织Bmal1蛋白水平明显升高(P＜0.05);与二至丸1:00组比较,二至丸7:00组小鼠血清ALT和AST水平显著升高,肝组织Bmal1、Cry1蛋白水平,二至丸19:00组肝组织Bmal1蛋白水平均明显降低(P＜0.01).结论 二至丸对D-半乳糖诱导的小鼠衰老性肝损伤具有显著的保护作用,且其药理作用具有明显的时间差异性,其中于1:00给予二至丸的改善作用更好,作用机制可能与抗氧化应激、改善生物钟紊乱有关.