维生素A对一氧化氮诱导损伤的奶牛乳腺上皮细胞内乳蛋白合成下降的缓解作用

本试验旨在研究添加维生素A对一氧化氮(NO)诱导损伤的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)内乳蛋白合成下降的缓解作用.试验采用单因子完全随机试验设计,以二乙烯三胺/一氧化氮聚合物(DETA/NO)作为氧化应激源,将第3代BMECs随机分为9组,分别为对照组(CON 组)、NO 损伤组(NO 组)和 NO 损伤+不同浓度(0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、4.00 μg/mL)维生素 A 预保护组(NA0.05、NA0.1、NA0.2、NA0.5、VA1、VA2 和 NA4 组),每组4个重复.待细胞生长融合至80％～90％后,使用无血清培养基饥饿培养12 h后,CON组不添加维生素A和DETA/NO继续培养30 h;NO组不添加维生素A培养24 h后,再添加1 000 μmol/L的 DETA/NO 继续培养 6 h;NA0.05、NA0.1、NA0.2、NA0.5、VA1、VA2 和 NA4 组分别添加 0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、4.00 μg/mL 的维生素 A 培养 24 h 后,再添加1 000 μmol/L DETA/NO继续培养6 h.结果显示:与CON组相比,NO组细胞的相对增殖率以及细胞内硫氧还蛋白还原酶(TrxR)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、p70核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)活性与总抗氧化能力(T-AOC)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)含量以及αs1-酪蛋白(CSN1S1)、β-酪蛋白(CSN2)、κ-酪蛋白(CSN3)、mTOR、S6K1、真核起始因子4E(eIF4E)、真核起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)、信号转导和转录激活因子5(STAT5)的mRNA相对表达量显著降低(P＜0.05),诱导型氧化氮合酶(iNOS)活性、活性氧(ROS)和NO含量显著升高(P＜0.05).与NO组相比,NA0.2～NA4组TrxR、CAT、GPx活性与T-AOC显著升高(P＜0.05);NA0.2～NA1组CSN1S1的mRNA相对表达量显著上调(P＜0.05);NA1组S6K1活性和GPx1、CSN2和酪氨酸激酶2(JAK2)的mRNA相对表达量显著上调(P＜0.05),NO和ROS含量显著下降(P＜0.05);NA4组mTOR、S6K1、4EBP1和eIF4E的mRNA相对表达量显著上调(P＜0.05),iNOS活性显著下降(P＜0.05);NA2、NA4组mTOR含量、TrxR和STAT5的mRNA相对表达量显著上调(P＜0.05).综上可知,NO诱导损伤BMECs后导致其细胞活力、抗氧化能力和乳蛋白合成相关酶活性及基因表达的下降;维生素A对NO诱导损伤的BMEC内乳蛋白合成下降有缓解作用,其效果以0.20～2.00 μg/mL较好,尤以1.00 μg/mL最好.