Lnc-TMEM132D-AS1高表达明显降低非小细胞肺癌对奥希替尼的敏感性

目的 建立奥希替尼获得性耐药非小细胞肺癌(NSCLC)细胞模型,筛选耐药前后差异表达的长链非编码RNA(lncRNAs),并探讨筛选的lncRNA在奥希替尼获得性耐药中的作用及分子机制.方法 奥希替尼获得性耐药细胞株H1975_OR和HCC827_OR是由奥希替尼敏感的NSCLC细胞株H1975和HCC827(分别命名为H1975_S和HCC827_S)建立而来;通过CCK-8、克隆形成及流式凋亡实验检测细胞对奥希替尼的敏感性;RNA测序(RNA-seq)、实时荧光定量PCR(qPCR)技术筛选耐药前后差异表达的lncRNAs;采用CCK-8、克隆形成及Transwell实验检测所筛选的lncRNA在NSCLC细胞奥希替尼获得性耐药中的作用;通过核质分离、生物信息学分析及qPCR技术观察该lncRNA的亚细胞定位,并探索其下游互作分子.结果 H1975_OR与HCC827_OR对奥希替尼的耐药指数分别为598.70和428.82(P<0.001).耐药株的生长增殖与克隆形成能力显著提高,而凋亡率降低(P<0.01).RNA-seq提示H1975_OR与H1975_S之间以及HCC827_OR与HCC827_S之间有共同差异表达的lncRNAs 34个.qPCR验证发现,lnc-TMEM132D-AS1在耐药性NSCLC细胞株中升高最为显著(P<0.01).TCGA数据库分析提示,lnc-TMEM132D-AS1在NSCLC组织中的表达水平高于癌旁组织(P<0.001),且与患者预后不良相关(P<0.05).Lnc-TMEM132D-AS1过表达可提高奥希替尼处理下敏感株的生长增殖、克隆形成及迁移能力(P<0.05),而敲低其表达水平可部分恢复耐药株的奥希替尼敏感性(P<0.01).lnc-TMEM132D-AS1主要定位在胞质,生物信息学分析提示hsa-miR-766-5p是其潜在靶点,两者表达水平呈负相关(P<0.01).对hsa-miR-766-5p下游的靶mRNAs分析提示相关基因主要集中于Ras信号通路.结论 Lnc-TMEM132D-AS1在奥希替尼获得性耐药NSCLC细胞株中表达显著上调,明显降低了NSCLC细胞对奥希替尼的敏感性,是NSCLC奥希替尼获得性耐药的潜在生物标志物及治疗靶标.