内皮素受体B基因过表达对乳腺癌ZR-75-1细胞活力和周期的影响

目的 探讨过表达内皮素受体B(EDNRB)基因对人乳腺癌ZR-75-1细胞活力和细胞周期的影响.方法 设计EDNRB基因特异性引物,与GV492载体连接构建含EDNRB基因全长序列的过表达载体,慢病毒包装后转染ZR-75-1细胞,构建稳定过表达EDNRB的乳腺癌细胞系.用半定量逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测EDNRB mRNA和蛋白的表达水平,用噻唑蓝法检测EDNRB过表达对细胞生长的影响,用流式细胞术检测EDNRB过表达对细胞周期的影响,用蛋白质印迹法检测EDNRB过表达对细胞周期相关蛋白表达的影响.结果 未处理组、GV492转染组和GV492-EDNRB转染组的EDNRB mRNA表达水平分别为0.22±0.13、0.13±0.10和1.79±0.12,EDNRB蛋白相对表达水平分别为0.75±0.04、0.80±0.21和1.43±0.10,GV492-EDNRB转染组的上述指标与未处理组和GV492转染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01).未处理组和GV492-EDNRB转染组的细胞存活率分别为0.98±0.58和0.62±0.15,G1期细胞百分比分别为(52.10±1.25)％和(63.35±1.06)％,抑癌蛋白53(p53)蛋白相对表达水平分为0.19±0.03和0.36±0.05,p21蛋白相对表达水平分为0.42±0.04和0.78±0.17,细胞周期蛋白1(CCND1)蛋白相对表达水平分为0.34±0.11和0.79±0.27,周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白相对表达水平分为0.83±0.14和0.36±0.01,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 本实验成功构建了EDNRB基因过表达的乳腺癌ZR-75-1细胞系;EDNRB过表达抑制了ZR-75-1细胞生长,并将细胞周期阻滞在G1期,其机制可能与p53-p21-CCND1/CDK4通路有关.