温阳解郁方通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路对抑郁小鼠前额皮质自噬的影响

目的 探讨温阳解郁方对抑郁小鼠前额皮质自噬水平的影响及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路的调控作用.方法 仔鼠出生后随机分为空白对照组12只、模型组60只,模型组采用母婴分离联合慢性束缚应激制备抑郁小鼠模型,离乳后随机分为模型组,温阳解郁方低、中、高剂量(8.35、16.70、33.40g·kg-1)组和氟西汀(2.6mg·kg-1)组,于离乳第21天至束缚完成第111天给予药混饲料干预.采用糖水偏好、悬尾实验和旷场实验评价小鼠焦虑抑郁行为;免疫组化法检测小鼠前额皮质泛素结合蛋白(p62)的表达;免疫荧光组织化学法检测自噬效应蛋白(Beclin-1)、自噬微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白的表达;Western Blot和Real-time PCR法检测PI3K/Akt/mTOR信号通路及自噬相关指标的蛋白和mRNA表达水平.结果 行为学实验中,与正常对照组比较,模型组小鼠糖水偏好度、中央区活动时间及中央穿越次数明显降低,悬尾不动时间明显升高(P＜0.01);与模型组比较,温阳解郁方中、高剂量组和氟西汀组小鼠糖水偏好度、中央区活动时间及中央穿越次数明显增加,悬尾不动时间明显缩短(P＜0.05,P＜0.01).免疫组化、免疫荧光、Western Blot和Real-time PCR实验中,与正常对照组比较,模型组小鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路和p62的蛋白及mRNA表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01)、Beclin-1和LC3的蛋白及mRNA表达水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,温阳解郁方中、高剂量组和氟西汀组小鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路和p62的蛋白及mRNA表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01),Beclin-1和LC3的蛋白及mRNA表达水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 温阳解郁方可能通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,降低前额皮质神经元和胶质细胞自噬水平,进而发挥抗抑郁疗效.