日本蛇根草(Ophiorrhiza japonica)OjDFR2基因的克隆及其可溶性重组蛋白的制备
wf（2022）
Abstract
二氢黄酮醇4-还原酶是将二氢黄酮醇转变为花色苷的关键酶,同时也是改变植物呈色的重要调控点.本研究在克隆得到日本蛇根草DFR2基因的基础上,将该基因插入原核表达载体pET32a,完成重组表达质粒pET32a-OjDFR2的构建,同时利用冻融法将该质粒转入大肠杆菌BL21感受态细胞中用于重组蛋白的表达.随后,在不同IPTG浓度、诱导温度及诱导时间下摸索BL21-pET32a-OjDFR2可溶性重组蛋白的最佳诱导表达条件,并通过洗脱、透析与浓缩完成重组蛋白的纯化.研究结果显示,该重组蛋白最佳诱导表达条件为:IPTG浓度0.2mmol/L,15℃条件下诱导36 h.按照上述条件,制备并纯化获得了大量可溶性重组蛋白,为后续研究OjDFR2的酶学性质及生物学功能提供参考.
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