TpbA通过调节c-di-GMP抑制鲍曼不动杆菌ATCC17978生物膜的形成

目的 分析生物膜形成相关的酪氨酸磷酸酶A(TpbA)经调节3,5-环鸟苷二磷酸(c-di-GMP)影响鲍曼不动杆菌ATCC17978生物膜的形成.方法 通过上海生工合成TpbA基因序列,构建pET-28a-TpbA载体,原核重组表达目的蛋白TpbA经亲和层析纯化后并用western blot验证,将该载体转入鲍曼不动杆菌ATCC17978,采用western blot和磷酸酶活性实验鉴定TpbA表达及活性,分析c-di-GMP表达水平及生物膜形成情况.结果 在成功构建pET-28a-TpbA载体并证实表达TpbA的基础上,将该载体转入鲍曼不动杆菌ATCC17978,western blot表明TpbA过表达(P＜0.05),磷酸酶活性实验证实过表达的TpbA具有酶活性(P＜0.05).进一步分析发现,ATCC17978中TpbA过表达能够降低c-di-GMP的水平(P＜0.05),表明TpbA能够有效调节鲍曼不动杆菌的c-di-GMP.ATCC17978中c-di-GMP相关的生物膜形成在TpbA过表达作用下能够被显著抑制(P＜0.05).结论 本研究初步证实了 TpbA通过调节c-di-GMP,可以抑制ATCC17978生物膜形成,为抑制鲍曼不动杆菌生物膜的形成提供了新的潜在靶点和实验数据.