新型冠状病毒肺炎患者粪便中新型冠状病毒的分离鉴定

[目的]分离鉴定新型冠状病毒肺炎(COVID?19)患者粪便标本中的新型冠状病毒(SARS?CoV?2),并进行生物学特性分析.[方法]利用Vero E6细胞对收集到的SARS?CoV?2核酸阳性粪便标本开展病毒分离,对产生细胞病变的培养物进行病毒核酸检测、免疫荧光抗原检测、病毒含量测定及全基因组测序分型.收集每代细胞培养物后进行半数组织培养感染剂量(TCID50)实验.[结果]8份粪便标本经处理后分别接种Vero E6细胞,培养48 h,1份标本在Vero E6细胞上发现明显细胞病变.8例COVID?19患者粪便病毒核酸阳性标本中分离到1株SARS?CoV?2,阳性分离率为12.5％.病毒能稳定传至第3代,P1代病毒TCID50为104.0/0.2 mL,P2代病毒TCID50为104.5/0.2 mL,P3代病毒TCID50为104.75/0.2 mL.8份粪便样本中仅1份有SARS?CoV?2活毒的复制扩增,传代培养的核酸检测Ct值约为10.该分离株的序列与Wuhan?Hu?1株序列(GenBank MN908947)的同源性>99.99％.[结论]从COVID?19患者粪便中分离到SARS?CoV?2活毒株,COVID?19患者中不仅存在粪便排毒的现象,且有活病毒存在.