基于gcp基因的溶血性曼氏杆菌LAMP检测方法的建立

为建立一种快速、准确并可定量检测溶血性曼氏杆菌的环介导等温扩增(LAMP)方法,本研究针对溶血性曼氏杆菌gcp基因设计5条特异性引物,在链置换DNA聚合酶的作用下,优化反应条件,并进行特异性和敏感性试验.特异性检测结果表明,建立的LAMP扩增方法可以在65 min内完成,并具有良好的特异性,检测化脓隐秘杆菌、肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌、牛支原体、鼠伤寒沙门菌、溶血性巴氏杆菌等其他6种常见牛呼吸道综合征致病菌和空白对照(水)时结果均为阴性;灵敏性检测结果表明,建立的LAMP方法检测溶血性曼氏杆菌质粒标准品的最低检出浓度为0.855×10-4 ng/μL;在对临床样品的检测中,本研究建立的LAMP方法对溶血性曼氏杆菌的检出率为52.63％(10/19)大于PCR方法的检出率47.36％(9/19).以上结果表明,本研究建立的基于gcp基因的溶血性曼氏杆菌LAMP检测方法为溶血性曼氏杆菌的快速检测提供了一种新的技术手段,该方法特异性强、灵敏度高、快速简便,可将该方法推广至基层和流行病调查一线,应用于该病原的快速检测.