伪狂犬病病毒变异株UL43和UL56基因失活株的构建与生物学特性分析

为探究UL43与UL56基因失活对伪狂犬病病毒(PRV)变异株毒力的影响,本研究基于伪狂犬病病毒(PRV)变异株AH02LA细菌人工染色体(BAC)BACPRV-G,应用En Passant操作技术,分别将UL43与UL56基因的起始密码子进行点突变,获得两株重组BAC株:BACPRV-G-UL43mut与BACPRV-G-UL56mut.之后将携带同源臂的PRV AH02LA gE/gI基因分别于BACPRV-G-UL43mut和BACPRV-G-UL56mut共转染猪睾丸(ST)细胞,从而获得重组病毒PRV-UL43mut和PRV-UL56mut.生长动力学试验显示PRV-UL43mut病毒滴度在感染后12 h有升高趋势,表明UL43基因可能在感染细胞早期抑制病毒增殖;PRV-UL56mut与亲本毒株PRV AH02LA生长动力学相似,表明UL56基因对病毒生长性能无显著影响.荧光定量PCR试验发现UL56基因可抑制感染细胞早期主要组织相容性复合物Ⅰ类分子的转录.此外,小鼠致病力试验显示,相较于亲本毒PRV AH02LA(LD50=10-3.26/0.2 mL),PRV-UL43mut(LD50=10-2.63/0.2 mL)与PRV-UL56mut(LD50=10-2.19/0.2 mL)对小鼠的致病力均降低,表明UL43基因与UL56基因可能介导病毒对小鼠的致病性.本研究成功构建了PRV变异株UL43、UL56基因失活株,为进一步揭示PRV免疫逃逸的机制奠定基础,也为研制更加安全有效的PRV弱毒疫苗提供理论依据.