钙库操纵性钙内流参与调节ox-LDL诱导的血管内皮细胞通透性改变

目的 利用体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),探讨钙库操纵性钙内流(store-operated calcium entry,SOCE)在氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的血管内皮细胞通透性改变中的作用.方法 体外培养HUVECs,传代3次后,用于检测跨内皮电阻(transendothelial electrical resistance,TER)的细胞随机分为对照组和不同剂量ox-LDL(10、25、50、100 μg/mL)干预组(n=3).培养于载玻片上的细胞随机分为对照组和ox-LDL 24 h组、ox-LDL 48 h组,免疫荧光检测细胞骨架蛋白F-actin及细胞连接蛋白VE-cadherin的分布,免疫印迹检测VE-cadherin的含量.细胞孵育钙离子探针(Fluo-3/AM)后,激光共聚焦检测细胞内钙含量(对照组、ox-LDL组、ox-LDL+2APB组)以及SOCE(对照组、ox-LDL 24h组、ox-LDL 48 h组).结果 低剂量的ox-LDL(10、25 μg/mL)对TER无明显影响,高剂量ox-LDL(50、100 μg/mL)在6 h内对TER影响不明显,但在12 h引起TER降低(P＜0.05),此效应在24 h和48 h更加明显(P＜0.05).Ox-LDL(100 μg/mL)处理后24、48 h,VE-cadherin的表达减少(P＜0.05),并影响F-actin的形态和分布;HUVECs的游离钙浓度显著增加(P＜0.05),此效应被SOCE抑制剂2-APB阻断,2-APB能够减弱ox-LDL 对TER的影响.ox-LDL(100 μg/mL)处理48 h后,SOCE的振幅显著降低(P＜0.05).SOCE降支速度在ox-LDL处理24 h后呈现降低趋势,而在ox-LDL处理48 h后呈显著下降(P＜0.05).结论 ox-LDL通过延长内皮细胞SOCE的持续时间上调细胞内游离钙浓度,影响细胞骨架的排列和细胞间连接的完整性,引起细胞通透性的增加.