siRNA干扰CASK表达对INS-1细胞胰岛素分泌的影响

目的：利用小分子RNA干扰片段（siRNA）抑制大鼠胰岛细胞系INS-1中钙／钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶（CASK）基因的表达，观察其对钾离子刺激胰岛素分泌（KSIS）功能的影响。方法：利用脂质体Lipofectamine2000将针对靶基因CASK合成的五条特异性siRNA片段（siCASK-1，2，3，4，5）及对照组片段转染INS-1细胞。实时定量PCR及Western blot检测CASK基因表达变化，进行有效干扰片段的筛选。放射免疫法检测钾离子刺激INS-1细胞后胰岛素分泌量的改变。结果：转染100nM siRNAs 48h后，INS-1细胞中CASK基因表达明显降低（P<0.01）, KSIS功能显著降低(P<0.01)。结论：靶向siRNA可以特异性地抑制INS-1细胞中CASK基因表达，从而抑制钾离子诱导的胰岛素分泌。