RNAi沉默树突状细胞CD40基因的体外实验研究

目的 探讨RNAi沉默状细胞CD40基因治疗急性移植排斥反应的研究，为寻求治疗急性移植排斥反应提供基础研究。方法 参照Giannoukakis等报道的方法[1]培养树突状细胞（DC）细胞目的基因，制备带CD40 RNAi目的基因的干扰慢病毒载体转染DC，采用3HTdR掺入法检测单向混合淋巴细胞反应(MLR)。结果 1.成功建立了大鼠骨髓DCs的体外诱导方法；2．经测序及酶切鉴定，成功建立了带CD40的RNAi片段的慢病毒载体；3．带有CD40的RNAi片段的慢病毒载体成功转染DC；4．RNAi干扰后DC对脾淋巴细胞增殖起到抑制作用。结论 1.大鼠骨髓DCs的体外诱导方法安全，简便；2 .利用RNAi干涉技术能干扰DC上第二信号通道上CD40的表达，从而缺乏共刺激信号将导致T细胞的无能或凋亡；3.干涉树突状细胞CD40表达的技术建立是成功筛选得到了两条干涉效果良好的RNAi序列，同最初的预期比较符合，体外实验也证明了经过RNAi干涉的树突状细胞活化免疫细胞的能力显著下降。 RNA