重组鹅 β-防御素4蛋白的原核表达及其生物学特性分析

本实验利用RT-PCR方法从鹅体内扩增出1个新的鹅β-防御素： AvBD4，其包含171个碱基，编码56个氨基酸；经同源性分析，鹅AvBD4与鸡AvBD4同源性最高为80.9%；为研究新鹅β-防御素的生物学活性，采用His标签蛋白原核表达系统，将该基因亚克隆到pProEX HTa上，构建出重组表达质粒。将重组表达质粒转化到大肠杆菌Rosseta 感受态中，用IPTG进行诱导，诱导后经Tricine-SDS-PAGE电泳分析，诱导表达的蛋白大部分以包涵体形式存在。重组蛋白抗菌活性测定结果表明，重组鹅AvBD4蛋白对大肠杆菌，鸡白痢沙门氏菌，四联球菌，枯草芽孢杆菌及金黄色葡萄球菌均具有抗菌活性(P<0.05)，且随蛋白浓度的增加抑菌活性增强。此外，高浓度盐离子抑制重组蛋白的抗菌活性(P<0.05)。重组蛋白对鸡红细胞没有溶血活性(P>0.05)。