天马颗粒对结肠直癌细胞中FLI-1启动子甲基化影响

目的 研究天马颗粒对结直肠癌细胞中Friend白血病整合素1转录因子(Friend leukemia integration 1,FLI-1)启动子甲基化的作用机制.方法 以结直肠癌细胞HCT116、HT29、Caco-2为研究对象,每种细胞分为3组:Blank组、NC组、TMKL组.Blank组为空白对照,NC组予以空白血清干预,TMKL组予以天马颗粒血清干预.采用CCK8筛选天马颗粒血清最佳干预浓度,Western blot检测各组细胞中FLI-1蛋白表达,qPCR法检测各组细胞FLI-1 mRNA表达,ELISA法检测DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)、DNA甲基转移酶3a(DNA methyltransferase 3a,DNMT3a)蛋白表达,甲基化特异性PCR(methyla-tion-Specific PCR,MSP)检测各组细胞中FLI-1启动子甲基化.结果 天马颗粒血清对HCT116、HT29和Caco-2细胞增殖有抑制作用,其中20％的天马颗粒血清浓度抑制效果最佳.在HCT116细胞分组和Caco-2细胞分组中,同Blank组、NC组相比,TMKL组FLI-1蛋白及mRNA表达升高(P<0.05),Blank组同NC组相比差异无统计学意义(P>0.05);在HT29细胞分组中,Blank组、NC组和TMKL组FLI-1蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05).在HCT116、HT29和Caco-2细胞中,同Blank组、NC组相比,TMKL组DNMT1、DNMT3a的表达量下降(P<0.05),Blank组同NC组相比差异无统计学意义(P>0.05);在HCT116细胞中,同Blank组、NC相比,TMKL组细胞FLI-1启动子产生了部分去甲基化,甲基化减弱,非甲基化增多,NC组同Blank相比无变化;在HT29细胞中,Blank组、NC组和TMKL组细胞FLI-1启动子无甲基化;在Caco-2细胞中,同Blank组、NC相比,TMKL组细胞FLI-1启动子完全去甲基化,NC组同Blank相比无变化.结论 天马颗粒可能通过抑制DNMT1、DNMT3a蛋白表达,促使结直肠癌细胞中FLI-1启动子去甲基化,进而上调其表达.