lncRNA HOTAIRM1通过miR-17-5p调控慢性粒细胞白血病细胞的生长和转移

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)HOX反义基因间RNA髓系1(HOTAIRM1)调控慢性粒细胞白血病(CML)细胞生长和转移的可能分子机制.方法 qRT-PCR法检测60例CML患者和60例健康体检者的血清HOTAIRM1和miR-17-5p水平.将CML细胞系(K562细胞)作如下分组:①对照组(未转染)、siRNA-NC组(转染siRNA-NC)、siRNA-HOTAIRM1组(转染siRNA-HOTAIRM1)、pcDNA-NC组(转染pcDNA-NC)和pcDNA-HOTAIRM1组(转染pcDNA-HOTAIRM1);②对照组(未转染)、NC-mimic组(转染NC-mimic)、miR-17-5p-mimic组(转染miR-17-5p-mimic)、NC-inhibitor组(转染NC-inhibitor)和miR-17-5p-inhibitor组(转染miR-17-5 p-inhibitor);③siRNA-HOTAIRM1+NC-inhibitor组(共转染siRNA-HOTAIRM1和NC-inhibitor)和siRNA-HOTAIRM1+miR-17-5p-inhibitor组(共转染siRNA-HOTAIRM1和miR-17-5p-inhibitor).细胞不同转染后,通过MTT实验检测细胞增殖,AnnexinⅤ/PI双染色实验检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,qRT-PCR检测细胞中HOTAIRM1、miR-17-5p、WNT5A和β-catenin的mRNA水平,Western blot检测细胞中WNT5A和β-catenin的蛋白水平.通过双荧光素酶报告基因实验验证HOTAIRM1与miR-17-5p、miR-17-5p与WNT5A的靶向关系.结果 与健康体检者相比,CML患者的血清HOTAIRM1水平升高(t=12.253,P<0.001),血清miR-17-5p水平降低(t=15.601,P<0.001).与对照组或siRNA-NC组相比,siRNA-HOTAIRM1组HOTAIRM1相对表达量、WNT5A和β-catenin的mRNA和蛋白相对表达量、细胞活力、迁移和侵袭细胞数量均降低(P<0.05),而miR-17-5p相对表达量升高(P<0.05).与对照组或pcDNA-NC组相比,pcDNA-HOTAIRM1组HOTAIRM1相对表达量、WNT5A和β-catenin的mRNA和蛋白相对表达量、细胞活力、迁移和侵袭细胞数量均升高(P<0.05),而miR-17-5p相对表达量降低(P<0.05).HOTAIRM1靶向抑制miR-17-5p,miR-17-5p靶向抑制WNT5A(P<0.05).与对照组或NC-mimic组相比,miR-17-5p-mimic组miR-17-5p相对表达量升高,WNT5A和β-catenin的mRNA和蛋白相对表达量降低,细胞活力降低,迁移和侵袭细胞数量降低(均P<0.05).与对照组或NC-inhibitor组相比,miR-17-5p-inhibitor组miR-17-5p相对表达量降低,WNT5A和β-catenin的mRNA和蛋白相对表达量升高,相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量升高(均P<0.05).与si-HOTAIRM1+NC-inhibitor组相比,si-HOTAIRM1+miR-17-5p-inhibitor组相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量、WNT5A和β-catenin的mRNA和蛋白相对表达量升高(均P<0.05).结论 HOTAIRM1可能通过miR-17-5p/WNT5A/β-catenin信号通路来调节CML细胞的生长和转移.