miR-143-5p靶向AGR2在肝癌细胞增殖和凋亡中的作用

目的 探讨miR-143-5p在肝癌细胞增殖和凋亡中的作用及其机制.方法 qRT-PCR检测正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞(BEL-7402、HepG2、SMMC-7721、MHCC-97H和Hep3B)中的miR-143-5p表达.选取肝癌细胞BEL-7402和HepG2,将每株肝癌细胞分别分为:mimics-NC组(转染阴性对照mimics-NC)和miR-143-5p mimics组(转染miR-143-5p mimics).采用MTT法、克隆形成实验、流式细胞术和Western blot分别检测mimics-NC组和miR-143-5p mimics组细胞增殖能力、克隆形成能力、凋亡率和凋亡相关基因(Bax、Caspase-3和Bcl-2)的表达.通过靶基因预测网站RNA22预测miR-143-5p的靶基因.双荧光素酶报告基因验证miR-143-5p和靶基因前梯度蛋白2(AGR2)关系.qRT-PCR和Western blot检测mimics-NC组和miR-143-5p mimics组肝癌细胞BEL-7402和HepG2中AGR2的表达水平.再将肝癌细胞BEL-7402和HepG2分别分为:si-NC组和si-AGR2组,分别转染阴性对照si-NC和si-AGR2.采用MTT、克隆形成实验和流式细胞术分别检测si-NC组和si-AGR2组细胞增殖能力、克隆形成能力和凋亡率.结果 肝癌细胞BEL-7402、HepG2、SMMC-7721、MHCC-97H和Hep3B中的miR-143-5p表达明显低于正常肝细胞HL-7702(P<0.01).与mimics-NC组相比,miR-143-5p mimics组BEL-7402和HepG2细胞增殖能力和克隆形成能力明显降低(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.01).与mimics-NC组相比,miR-143-5p mimics组BEL-7402和HepG2中Bax和Caspase-3表达明显上升(P<0.01),Bcl-2表达明显下降(P<0.01).靶基因预测网站和双荧光素酶报告基因验证AGR2是miR-143-5p的靶基因.与mimics-NC组相比,miR-143-5p mimics组靶基因AGR2的表达明显下降(P<0.01).与si-NC组相比,si-AGR2组BEL-7402和HepG2细胞增殖能力和克隆形成能力明显下降(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.01).结论 miR-143-5p可能通过靶向AGR2抑制肝癌细胞的增殖,促进肝癌细胞的凋亡.