双水相系统纯化重组苯丙氨酸脱氢酶的条件研究

目的 研究重组大肠埃希菌表达的苯丙氨酸脱氢酶在双水相系统中的分配,并对其影响因素进行单因素考察,优化出最佳的双水相系统.方法 采用高效液相色谱法检测,依据纯度和收率来优化纯化条件.研究了聚乙二醇(PEG)分子量,聚乙二醇(PEG)浓度,硫酸铵浓度,氯化钠浓度,pH对苯丙氨酸脱氢酶在双水相中分配的影响.结果 优化的双水相系统为:PEG4000 10％,硫酸铵14％,氯化钠10％且pH 6.5,此系统下的酶活收率、纯化倍数及酶比活分别为162％、578及9280 U/mg.结论 在双水相系统的中间层提取苯丙氨酸脱氢酶是一种新的纯化方式,此方法简单易行,收率较高,纯度好且处理量大,仅通过一步实验就达到初级纯化和浓缩的目的,是一种经济有效的纯化方法,为下步工业化生产奠定基础.