miR-31靶向SATB2对结肠癌上皮细胞HCT116焦亡的促进作用

目的 探讨miR-31通过靶向SATB2对结肠癌上皮细胞HCT116焦亡的促进作用,以期为结肠癌发病机制的研究及治疗提供新的靶标.方法 常规培养HCT116细胞,采用脂质体瞬时转染方法转染miR-31 mimic(miR-31模拟物)和miR-31 inhibitor(miR-31抑制剂)分别过表达和敲低miR-31,转染si-SATB2敲低SATB2的表达;另转染pEXP-RB-Mam-SATB2质粒(过表达SATB2)和pEXP-RB-Mam质粒(空载体).试验均设加入无血清、无青链霉素的DMEM的细胞作为对照,均重复3次.72 h后收集各组细胞,提取蛋白,Western blot方法检测SATB2及焦亡信号通路相关蛋白NLRP3、胱天蛋白酶(Caspase)-1、胃泌素蛋白D(gasdermin D,GSDMD)-N、IL-18和IL-1β的表达.结果 与对照组相比,miR-31过表达组和敲低SATB2组细胞SATB2蛋白的表达水平均显著下降(t分别为4.677和4.463,P分别＜0.01 和＜0.05),NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-18 和 IL-1β 蛋白表达水平均显著升高(t=2.859～6.843,P＜0.05或＜0.01);敲低 miR-31 组 SATB2 蛋白表达水平显著升高(t=3.313,P＜0.05),NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-18和IL-1β蛋白表达水平均显著下降(t=2.747～3.545,P＜0.05或＜0.01).与对照组相比,空载体组SATB2、NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-18和IL-1β蛋白表达水平差异均无统计学意义(t=0.033 10～0.811 1,P均＞0.05);SATB2过表达组SATB2蛋白表达水平显著升高(t=6.186,P＜0.01),NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-18和IL-1β蛋白表达水平均显著下降(t=2.963～7.894,P＜0.05或＜0.01),与敲低miR-31组趋势一致.结论 miR-31通过靶向SATB2上调HCT116细胞中经典的细胞焦亡信号通路蛋白的表达,促进细胞焦亡.