前信使RNA加工因子19在膀胱癌组织的表达及其对细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 检测前信使RNA(mRNA)加工因子19(Prp19)在膀胱癌组织及细胞中的表达水平,探讨Prp19对膀胱癌细胞生物学功能的影响.方法 运用UALCAN数据库分析Prp19基因在膀胱癌组织中的表达水平,利用GEPIA数据库分析Prp19与膀胱癌患者预后的关系,收集膀胱癌及癌旁标本,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)技术检测膀胱癌及癌旁标本、正常膀胱上皮细胞及膀胱癌细胞中Prp19 mRNA和蛋白质的相对表达水平.利用免疫组织化学染色检测膀胱癌患者及其癌旁组织中Prp19蛋白的表达.在膀胱癌T24细胞中转染小干扰RNA(siRNA)-Prp19,将细胞分为转染组(si-Prp19)和对照组(NC),采用RT-qPCR和Western blot验证转染效率.利用细胞克隆形成实验和细胞计数盒(CCK-8)实验检测细胞增殖能力;利用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;利用Western blot检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)及上皮-间充质转化(EMT)标志蛋白的表达水平;两组间比较采用t检验.结果 UALCAN数据库显示Prp19在膀胱癌组织中表达水平升高(P＜0.001),GEPIA数据库显示Prp19表达与患者总生存期(OS)呈负相关(P＜0.05);膀胱癌组织中Prp19 mRNA和蛋白相对表达水平高于癌旁组织(mRNA:1.36±0.05比1.00±0.05,t=7.763,P＜0.05;蛋白:149.33±6.51 比 99.33±4.04,t=11.307,P＜0.05),T24 和 5637 细胞中Prp19相对表达水平高于正常膀胱上皮细胞(mRNA:3.11±0.15比1.01±0.12、1.92±0.12比1.01±0.12,t=18.562、9.192,P＜0.05;蛋 白:224.00±5.00 比 99.67±4.51、183.67±6.03 比99.67±4.51,t=31.984、9.328,P＜0.05);另外转染组细胞Prp19 mRNA和蛋白相对表达水平低于对照组(mRNA:O.49±0.09 比 1.00±0.09,t=6.661,P＜0.05;蛋白:56.33±6.03 比 99.67±6.51,t=8.462,P＜0.05);转染组细胞克隆形成数目低于对照组[(100.33±10.69)个比(200.33±13.58)个,t=10.022,P＜0.01];转染组细胞在48、72、96 h的增殖活性均低于对照组(48 h:0.32±0.05 比 0.50±0.07、72 h:0.48±0.05 比 0.72±0.06、96 h:0.76±0.05 比 1.15±0.09,t=3.719、5.144、6.331,P＜0.05);转染组细胞迁移数目低于对照组[(74.33±7.02)个比(152.67±11.68)个,t=9.957,P＜0.01],转染组细胞侵袭数目低于对照组[(96.33±7.51)个比(161.33±8.02)个,t=10.249,P＜0.01],差异均有统计学意义.结论 Prp19在膀胱癌组织和细胞中异常高表达,可作为促癌基因促进膀胱癌的发生及发展.