橙皮素抑制膀胱肿瘤细胞T24增殖及其机制研究

目的 探讨橙皮素对膀胱肿瘤细胞T24细胞株生长繁殖的影响,探讨橙皮素的相关作用机制.方法 体外培养购自美国模式培养无集存库人膀胱肿瘤T24细胞株,将2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、60.0 μmol/L橙皮素分别作用于T24细胞株24、48、72 h并通过噻唑蓝(MTT)法观察细胞生长和增殖状况;通过流式细胞仪检测细胞生长G0期与G1比值百分比的变化;并通过Transwell实验观察橙皮素对T24细胞迁移和侵袭的影响;蛋白质印迹法(Western blot)观察磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达及与内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)比值的变化.两组之间的比较使用独立样本t检验,多组间比较使用单因素方差分析.结果 橙皮素可明显抑制T24细胞株的增殖,且经橙皮素处理24 h组的半抑制浓度(IC50)[(20.79±1.82)μmol/L]与处理48 h 组的 IC50[(21.34±1.64)μmol/L]相当,两者差异无统计学意义(t=0.562,P＞0.05),而两组高于72 h组(10.28±1.16)μmol/L,有统计学意义(t=10.498、11.060,P＜0.05);10、20 μmol/L 组作用 48 h 后细胞周期 G0/G1 百分比分别为(70.12±5.21)％、(78.46±7.43)％,高于对照组[(57.86±5.39)％],差异有统计学意义(t=12.260、20.600,P＜0.05);10、20 μmol/L 组作用 48 h 后侵袭抑制率分别为(25.37±1.76)％、(41.31±1.86)％,迁移的抑制率分别为(21.23±1.09)％、(34.67±1.58)％,高于对照组侵袭抑制率[(0.21±0.02)％]和迁移抑制率[(0.27±0.03)％],差异有统计学意义(t=25.170、41.110;t=21.030、34.470,P＜0.05);10、20 μmol/L 组作用48 h 后 p-ERK、PI3K、p-Akt、N-Cadherin 蛋白表达降低,与内参的比值分别为(0.46±0.06、0.44±0.06;0.54±0.08、0.51±0.09;0.48±0.06、0.47±0.07;0.50±0.05、0.49±0.05)比对照组与内参比值(0.67±0.06、0.82±0.11、0.71±0.04、0.78±0.10)低,差异有统计学意义(t=4.205、4.283、4.231、5.278;t=4.231、4.310、4.240、5.281,P＜0.05),E-Cadherin蛋白表达升高,与内参的比值分别为(0.73±0.14、0.74±0.20)比对照组与内参比值(0.56±0.08)高,差异有统计学意义(t=7.181、7.183,P＜0.05).结论 橙皮素对膀胱癌T24细胞株生长有抑制作用,其机制可能与PI3K/Akt和RAS/MAPK信号通路有关.