miR-9通过靶向PI3K抑制增生性瘢痕成纤维细胞的生长

目的 探讨miR-9能否通过靶向PI3K抑制增生性瘢痕成纤维细胞的生长.方法 自2020年9月至2021年9月,北部战区总医院烧伤整形科选取12只健康成年的新西兰长耳兔随机分成对照组(6只)和瘢痕组(6只),对瘢痕组进行造模.HE染色检测两组组织形态.实时荧光定量PCR检测组织中miR-9和PI3K的mRNA表达情况,对miR-9和PI3K的表达用Pearson相关系数进行相关性分析.取人增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic scar fibroblast,HSFb),分成psiCHECK-WT-PI3K+miR-9对照组、psiCHECK-WT-PI3K+miR-9模拟物组、psiCHECK-MUT-PI3K+miR-9对照组、psiCHECK-MUT-PI3K+miR-9模拟物组,分别转染相应的序列,转染后48 h采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测荧光素酶和肾荧光素酶的表达.取HSFb,分为miR-9对照组和miR-9模拟物组,转染后0、12、24、36和48 h,采用噻唑蓝法检测实验检测细胞增殖活性,处理后24 h,采用Annexin V-FITC/PI试剂盒测定细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法检测PI3K、Caspase 3和Bcl-2蛋白表达情况.细胞实验中样本数均为3.对数据行t检验及Pearson相关系数分析.结果 HE染色结果证明瘢痕组的组织中成纤维细胞过度增殖、炎症细胞浸润,模型构建成功.实时荧光定量PCR实验检测结果,与对照组相比瘢痕组miR-9显著下调(t=11.020,P<0.05),与对照组相比瘢痕组PI3K表达上调明显(t=10.840,P<0.05).Pearson相关系数进行相关性分析在所有组织中,miR-9和PI3K的表达呈负相关.转染后48 h,psiCHECK-WT-PI3K+miR-9模拟物组PI3K活性明显低于psiCHECK-WT-PI3K+miR-9对照组的PI3K活性(t=8.648,P=0.001);psiCHECK-MUT-PI3K+miR-9对照组和psiCHECK-MUT-PI3K+miR-9模拟物组PI3K活性相近(t=2.053,P=0.109).miR-9模拟物组转染后12、24、36和48 h时,细胞的增殖能力明显低于miR-9对照组(P<0.05).miR-9模拟物组转染24 h后,HSFb早期凋亡比例高于miR-9对照组(t=11.210,P=0.001).miR-9能够下调PI3K的表达,并且能够抑制Bcl-2的表达,上调Caspase 3的含量.结论 miR-9在增生性瘢痕组织中表达下调,可以通过打靶PI3K抑制HSFb的生长.