胰腺癌及癌旁组织中提取RNA样品的方法优化及鉴定

目的:优化胰腺癌及癌旁组织总RNA的提取方法,为胰腺相关疾病的发病机制研究提供高质量的实验样本.方法:采用组织块分离剪碎、RNase清洗及抑制等方法对胰腺癌及癌旁组织进行预处理,液氮研磨及trizol-氯仿抽提的方法提取组织RNA.通过琼脂糖凝胶电泳及生物分析仪鉴定RNA的完整性.使用等量RNA作为逆转录模板,以oligo dT引物对信使RNA(message RNA,mRNA)进行逆转录;以茎环结构引物对微小RNA(microRNA,miRNA)进行逆转录.通过定量PCR的方法检测mRNA及miRNA的表达水平.结果:相较于常规方法,优化方法提取的RNA样品降解程度低,完整性较高.相对于胰腺癌组织,癌旁组织RNA更易降解,mRNA的表达水平出现降低趋势;但miRNA的表达在胰腺癌及癌旁组织中无明显差异.结论:胰腺癌及癌旁组织的预处理可降低RNA降低程度,可为RNA的表达检测提供高质量的实验样本,增加实验准确度.