人树突状细胞的大量培养及鉴定

目的:探讨人树突状细胞体外大量培养及鉴定方法.方法:采用免疫磁珠法分离纯化CD34+干细胞;采用含有TPO、SCF、F1t3L和IL-3的扩增培养基培养1周,以及含有SCF、F1t3L、GM-CSF和IL-4的分化培养基培养2-3周,获得CD34+细胞来源树突状细胞.采用普通光学显微镜观察细胞形态,牛鲍氏血细胞计数板进行细胞计数,荧光抗体标记、流式细胞仪检测细胞纯度和细胞表面共刺激分子的表达情况.结果:以含有TPO、SCF、F1t3L和 IL-3的培养基扩展培养一周,及含有SCF、F1t3L、GM-CSF和IL-4的培养基诱导分化3周,可获得大量悬浮细胞;细胞数目扩增倍数约达50倍;普通光学显微镜下可见悬浮细胞有明显的树突状凸起;流式细胞术检测结果显示悬浮细胞中CD141和CD11c双阳性细胞(等同于单核细胞来源树突状细胞)比例达30％,此群细胞高表达HLA-DR和CD209,低表达共刺激分子CD80和CD86;细胞寿命较短,40天时培养体系中悬浮细胞和CD34+细胞来源树突状细胞数目急剧减少.结论:采用多细胞因子联合刺激可获得大量的树突状细胞,为树突状细胞的特性及功能学研究奠定了基础.