四逆散方中甘草在巨噬细胞中诱导Ⅰ型干扰素应答的作用与机制研究

目的 在巨噬细胞中确定四逆散中具有Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)调控作用的中药,并探究其具体作用靶点及主要作用成分.方法 通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测四逆散组方药材柴胡、枳实、白芍、甘草水提物对IFN-Ⅰ通路相关基因表达的影响;通过CCK-8法检测甘草水提物对巨噬细胞RAW264.7细胞活力的影响;qRT-PCR法检测甘草水提物对IFNα2诱导的干扰素诱导基因(ISGs)mRNA表达水平的影响;蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测甘草水提物对IFNα2诱导的JAK1、TYK2、STAT1、STAT2蛋白磷酸化水平的影响;qRT-PCR法检测甘草水提物中单体成分甘草酸、甘草苷、异甘草素、甘草素、18β甘草次酸对IFNα2诱导的ISGs的mRNA表达水平的影响.结果 四逆散组方药材柴胡、枳实、白芍各水提物对IFNα2诱导的Isg15和Ifit1表达水平无显著影响,而甘草水提物显著增加了 IFNα2诱导的Isg15和Ifit1的基因表达水平(P＜0.01、0.001):甘草水提物显著增加了 IFNα2诱导的JAK1、TYK2、STAT1、STAT2蛋白磷酸化(P＜0.05、0.01、0.001);甘草水提物中18β-甘草次酸能够显著增强IFNα2诱导的Isg15和Ifit1的mRNA表达(P＜0.001).结论 甘草水提物能够显著激活JAK-STAT信号通路并诱导IFN-Ⅰ下游ISGs的表达,具有较强的固有免疫激活作用.18β-甘草次酸可能是甘草水提物发挥激活IFN-Ⅰ通路的主要有效成分之一.