新西兰白兔不同内脏组织中实时荧光定量PCR内参基因的筛选

[目的]筛选新西兰白兔不同内脏组织中稳定表达的实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)内参基因,为新西兰白兔基因定量表达分析中内参基因的规范使用提供参考.[方法]以70日龄新西兰白兔的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及胃6种组织为研究对象,以β-actin、GAPDH、Ywhaz、HPRT1、18s rRNA、Sdha、B2M和CYP为候选内参基因,利用qRT-PCR和在线内参基因稳定性评价工具RefFinder中的geNorm、NormFind-er和BestKeeper程序对候选内参基因的表达稳定性进行分析.[结果]新西兰白兔不同内脏组织中内参基因稳定性不同,心脏组织中最稳定表达的内参基因为β-actin和HPRTI,肝脏组织中最稳定表达的内参基因为HPRT1和G4PDH,脾脏组织中最稳定表达的内参基因为β-actin和GAPDH,肺脏组织中最稳定表达的内参基因为Sdha和18S rRNA,肾脏和胃组织中最稳定表达的内参基因为CYP和β-actin.[结论]根据筛选出的新西兰白兔不同内脏组织中对应的稳定内参基因情况,推荐选择表达最稳定的3个及以上内参基因来进行目的基因的归一化,以提高真实性和可靠性.