PRV △gE/TK/US3基因缺失株的构建及对小鼠的免疫效力

为验证伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)US3基因缺失后作为疫苗的免疫效力,构建PRV △gE/TK/US3基因缺失株.利用PRV QYY2012变异株基因组扩增US3基因两侧序列作为同源重组的左右侧同源臂,以绿色荧光蛋白(EGFP)为标记基因,经酶切依次连接至pBluescript SK(—),构建重组转移载体pSK-US3-LR-EGFP.将pSK-US3-LR-EGFP和PRV △gE/TK株基因组共转染293 T细胞,以绿色荧光为标记经蚀斑纯化获得重组病毒PRV △gE/TK/US3/EGFP+株.将 pcGlobin2-Cre 质粒和 PRV △gE/TK/US3/EGFP+株基因组共转染 293 T 细胞,利用Cre-Loxp系统去除EGFP基因,蚀斑纯化无荧光重组病毒,获得PRV △gE/TK/US3基因缺失株,并对该毒株遗传稳定性、生物学特性、安全性和免疫效力进行初步研究.PCR及测序鉴定证实PRV △gE/TK/US3株缺失US3基因925 bp,在Vero细胞可稳定传代;与PRV △gE/TK亲本株相比,PRV △gE/TK/US3株病毒滴度较低,但仍具有良好的增殖能力.该基因缺失毒株接种小鼠后具有安全性,能产生较PRV △gE/TK株更高水平的抗PRV中和抗体,且能维持较长时间;PRV △gE/TK/US3株免疫小鼠对PRV强毒株攻击可提供完全保护力.结果表明,成功构建的PRV △gE/TK/US3基因缺失株具有良好的免疫原性,可作为优秀的伪狂犬病基因缺失疫苗候选种毒株.