绵羊AKT、PKC基因对其早期胚胎发育的作用研究

绵羊AKT(蛋白激酶B)、PKC(蛋白激酶C)基因是在早期胚胎发育过程中的重要基因.本研究旨在通过检测AKT、PKC在绵羊早期胚胎体外发育过程中的表达量和Ca2+波动变化,为进一步研究绵羊早期胚胎发育的分子机制提供理论依据.分别选择成熟卵母细胞、2-4细胞、8-16细胞及桑椹胚时期的RNA并将其反转录成cDNA,随后应用qRT-PCR分别检测各时期AKT和PKC的基因表达情况,分析其在早期胚胎发育过程中的表达规律;同时亦选择成熟卵母细胞及早期胚胎2-4细胞,8-16细胞和桑椹胚,分别应用Fluo-3AM钙离子探针孵育1 h,随后用激光共聚焦显微镜检测Ca2+波动变化情况.结果显示,Ion+6D激活后,随着绵羊早期胚胎的发育Ca2+的荧光强度会逐渐增加,桑椹胚时的荧光强度最强;AKT和PKC基因相对表达量随着绵羊早期胚胎的发育逐步升高,当其发育到桑椹胚时达到峰值,但是AKT、PKC在绵羊卵母细胞和早期胚胎各发育阶段中表达量存在一定的差异.结果表明,AKT和PKC基因在绵羊早期胚胎发育过程中表达并与Ca2+的浓度变化息息相关,可促进早期胚胎发育.