蛋白质二硫键异构酶a3的表达纯化、活性测定与小分子抑制剂的筛选

目的 通过大肠杆菌表达并纯化蛋白质二硫键异构酶a3(PDIA3)为筛选其小分子抑制剂奠定基础.方法 通过RT-PCR获得PDIA3基因,构建重组质粒pET28a-PDIA3,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂亲和层析获得PDIA3,SDS-PAGE鉴定纯度,酶标仪测定活性,Specs商业化合物库虚拟筛选PDIA3的抑制物,胰岛素比浊法对抑制物进行抑酶活性测定.结果 克隆序列与基因库序列一致.获得的纯化PDIA3比活力为4.17 U/mg,PDIA3具有催化二硫键断裂的能力,筛选到的化合物去甲氧基姜黄素和41974954对PDIA3有抑制作用.结论 成功表达并纯化出PDIA3,筛选到的去甲氧基姜黄素和化合物41974954对PDIA3有抑制作用,为PDI蛋白抑制剂和抗血栓药物的研发奠定了基础.