全悬浮驯化MDBK细胞应用于牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎二联灭活疫苗的效果评估

为了给规模化生产牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)提供悬浮细胞培养方法,本试验采用4种降血清方法,使贴壁MDBK细胞逐步适应了悬浮培养环境,最终获得了 1株MDBK悬浮细胞株,同时摸索出MDBK悬浮细胞株培养BVDV和IBRV抗原的最佳参数;将MDBK悬浮细胞株扩大到60 L和500 L后连同MDBK贴壁细胞一同接种BVDV和IBRV,比较3种细胞培养后的病毒滴度;通过使用悬浮培养方法制备BVDV-IBRV二联灭活疫苗,按照2.00、1.00、0.50 mL/头和0.25 mL/头4个剂量免疫健康牛,确定其攻毒保护效果,继而免疫不同年龄黑白花奶牛群体(包括犊牛、后备母牛和成年母牛),检测免疫后牛群的BVDV和IBRV中和抗体效价.结果显示:在60 L和500 L规模化放大培养过程中,IBRV 病毒滴度各为 8.25 lgTCID50/mL 和 8.00 lgTCID50/mL,BVDV 病毒滴度各为 8.00 lgTCID50/mL 和 7.75 lgTCID50/mL,与MDBK贴壁细胞株产毒毒价几乎相同;免疫攻毒保护试验中,最低免疫剂量为1.0 mL/头,免疫保护率能在80％以上;二联灭活苗免疫的牛群试验中,IBRV和BVDV中和抗体几何平均值均显著高于未免疫组,达到了免疫保护效果.结果表明,本试验成功筛选到1株MDBK悬浮培养细胞株,并且通过悬浮培养工艺制备的BVDV-IBRV二联灭活疫苗免疫效果良好,该MDBK细胞全悬浮培养株的成功驯化为疫苗规模化制备提供了科学依据.