海兰灰蛋鸡GM-CSF毕赤酵母表达及生物活性鉴定

为了揭示鸡重组粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rchGM-CSF)在免疫中的作用,本试验对海兰灰蛋鸡GM-CSF基因进行预测并通过PCR去掉信号肽,改造蛋白质编码区(CDS)3'端的终止密码子,使C末端带有c-myc和6His标签,构建毕赤酵母表达质粒pPICZαA/chGM-CSF,电转化感受态毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定后进行大规模诱导表达,收集上清,用His Bind Ni-NTA层析柱进行纯化,并通过淋巴细胞增殖试验鉴定rchGM-CSF的生物活性.结果显示,rchGM-CSF成功表达,在第3～4天时分泌表达达到高峰;rchGM-CSF按1∶5倍稀释时能极显著促进淋巴细胞分裂增生(P＜0.01),按1∶25倍稀释时能显著促进淋巴细胞增殖(P＜0.05),表明rchGM-CSF具有一定的免疫促进功能.