原代正常宫颈及宫颈癌细胞的培养方法

目的 探讨一种高效、可重复的宫颈上皮细胞原代培养方法.方法 本研究选取4例正常宫颈组织和4例宫颈鳞状细胞癌组织,并分别采用Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25％胰蛋白酶-EDTA?(中性蛋白酶联合法)?及Ⅰ型胶原酶消化法分离后进行原代培养.通过CD326、P40以及Ki-67+P16双染进行免疫荧光染色鉴定细胞来源.结果 正常宫颈上皮细胞原代培养14?d,汇合度可达70％～80％,传代可至4～5代,且荧光染色CD326、P40均表达强阳性,P16表达弱阳性,Ki-67仅在个别细胞核中表达;宫颈鳞状细胞癌细胞原代培养14?d,汇合度可达70％～80％,传代可至5～6代,荧光染色CD326和P40均表达强阳性,P16表达阳性,Ki-67广泛表达于细胞核.结论 Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25％胰蛋白酶-EDTA分离法及5％FBS的KFSM培养基可高效、多次重复原代培养正常宫颈上皮细胞;Ⅰ型胶原酶消化分离法及5％FBS的KFSM培养基培养可高效、多次重复原代培养宫颈鳞状细胞癌细胞.