慢病毒载体构建成纤维生长因子19过表达大肠癌细胞系及其对大肠癌细胞迁移活性的影响

目的 建立成纤维生长因子19(FGF19)稳定过表达的人大肠癌细胞系,为研究FGF19在大肠癌发生发展中的作用奠定基础.方法 将FGF19编码基因片段克隆到慢病毒载体中,测序鉴定后转染293T细胞,进行病毒包装及纯化并测定病毒滴度.慢病毒在感染复数为50 MOI的条件下,转染大肠癌SW480和SW620细胞.嘌呤霉素筛选获得稳定过表达FGF19的细胞系;用聚合酶链反应和蛋白质印迹法鉴定SW620和SW480稳转细胞株中FGF19的表达情况;用Transwell实验检测细胞迁移活性.结果 成功构建慢病毒FGF19过表达慢病毒载体,病毒滴度为4×108 TU·mL-1.与空载对照组(NC组)相比,稳定过表达FGF19的SW480-OE、SW620-OE细胞的FGF19 mRNA水平分别增高18.57倍(P<0.01)和32.29倍(P<0.01);SW480-NC、SW480-OE、SW620-NC及SW620-OE组中,FGF19蛋白相对表达水平分别为1.00±0.27,3.85±1.51,1.00±0.25及2.74±0.65;与NC组相比,SW480-OE和SW620-OE的FGF19蛋白表达水平均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05).SW480-OE和SW620-OE细胞的迁移细胞数相对NC组平均分别上调4.84倍(P<0.01)和4.51倍(P<0.05).结论 构建并获得相应的慢病毒感染稳转过表达FGF19大肠癌细胞株及其对照细胞,初步发现FGF19可促大肠癌细胞的迁移活性.