寨卡病毒感染人肝癌细胞HepG2后外泌体中差异miRNA分析

目的:探索人肝癌细胞HepG2感染寨卡病毒(Zika virus，ZIKV)后的外泌体miRNA的表达差异，对其靶基因进行预测、分析。方法:以感染复数0.5的ZIKV(ZJ03株)感染HepG2，以超速离心法提取、纯化感染2 d与未感染细胞的外泌体(Exo-ZIKV与Exo-NC)。以透射电镜观察外泌体形态，纳米粒径分析检测外泌体粒径分布，Western blot检测外泌体标志蛋白质等方法鉴定。提取纯化外泌体小RNA，进行miRNA测序与分析，对部分差异表达miRNA采用实时定量PCR验证。生物信息方法分析差异miRNA靶基因。结果:在透射电镜下呈杯托状双层膜小囊泡结构；粒径大小分布几乎一致但Exo-ZIKV浓度(5.24×10 8颗粒/ml )较Exo-NC(3.06×10 8 paritcle/ml)增多。Western blot检测出Hsp70、CD63和CD9蛋白表达，测序分析显示共20个差异表达miRNA，其中12个miRNA表达上调8个miRNA表达下调，上调miRNA多与抗病毒通路相关，差异表达miRNA对应的靶基因主要富集在嘧啶与嘌呤代谢等途径中。 结论:ZIKV感染能刺激HepG2细胞外泌体分泌增加，且引起外泌体miRNA表达变化，这为深入了解ZIKV感染导致肝细胞损伤机制提供新基础，为ZIKV治疗提供新的思路。