重叠基因在异源蛋白表达中的新应用
Journal of Biology（2022）
Abstract
大肠杆菌在调控异源蛋白的表达量和可溶性方面仍然存在困难.研究开发一种融合重叠基因结构和mRNA 5′-端序列优化的蛋白表达调控方法.在表达基因起始密码子前引入两个碱基TG,利用pET-28a质粒载体表达框的5′-端标签,与其形成TGATG的重叠基因类型的表达结构.再通过设计简并引物对异源基因mRNA的5′-端连续14个密码子区域进行同义密码子突变,改变mRNA的二级结构,实现重叠基因结构强度筛选.利用这种方法,在不改变质粒组成和外界条件的情况下就能影响异源蛋白的表达量,并通过影响翻译过程速率来调控蛋白可溶性.通过对多个异源基因表达优化实例,证明重叠基因结构在调控蛋白可溶性表达中的作用.为大肠杆菌中异源蛋白在表达量和可溶性问题的优化方面提供一种简单的调控策略.
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