清肾颗粒对肾间质纤维化模型大鼠JAK2/STAT3信号通路介导自噬的干预作用

目的 观察清肾颗粒对肾间质纤维化(RIF)模型大鼠Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路中蛋白表达的影响,探讨清肾颗粒抗RIF的作用靶点.方法 将50只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、3-甲基腺嘌呤组(3-MA组)、雷帕霉素组和清肾颗粒组,每组10只;制模过程中死亡6只,最终44只大鼠纳入数据分析,假手术组10只、模型组8只、3-MA组9只、雷帕霉素组8只、清肾颗粒组9只.采用5/6肾切除的方法复制RIF大鼠模型;假手术组仅切开皮肤、皮下脂肪后缝合,保留肾脏.术后清肾颗粒组按8 mL/kg的剂量灌胃清肾颗粒(在生理盐水中稀释成含药量为1 kg/L的混悬液);3-MA组按7.5 mL/kg的剂量腹腔注射3-MA〔用磷酸盐缓冲液(PBS)稀释成含药量为2 g/L的混悬液〕;雷帕霉素组按5 mL/kg的剂量腹腔注射雷帕霉素(使用时在二甲基亚砜中稀释成含药量为0.2 g/L的混悬液);假手术组和模型组给予2 mL生理盐水灌胃,均连续给药8周.采用生化法检测各组给药前后血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)水平;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测各组大鼠肾脏组织中JAK2、STAT3、微管相关蛋白质轻链3-Ⅱ型(LC3-Ⅱ)、膜突蛋白样BCL2作用蛋白1(Beclin-1)、P62、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原蛋白(C-Ⅳ)的蛋白表达水平.结果 假手术组给药前后BUN、SCr水平比较差异无统计学意义,给药后模型组、3-MA组、雷帕霉素组、清肾颗粒组BUN、SCr水平均较给药前明显升高(均P<0.05).模型组给药后血中BUN、SCr及肾组织JAK2、STAT3、LC3-Ⅱ、Beclin-1、NLRP3、α-SMA、C-Ⅳ的蛋白表达水平均较假手术组明显升高(均P<0.05),P62的蛋白表达水平较假手术组明显降低(P<0.05);雷帕霉素组血中BUN、SCr水平和肾组织中JAK2、STAT3、LC3-Ⅱ、Beclin-1、NLRP3、α-SMA、C-Ⅳ的蛋白表达水平均较模型组明显升高,P62的蛋白表达水平较模型组明显降低(P<0.05);清肾颗粒组、3-MA组血中BUN、SCr水平和肾组织中JAK2、STAT3、LC3-Ⅱ、Beclin-1、NLRP3、α-SMA、C-Ⅳ的蛋白表达水平均较模型组明显降低(均P<0.01),P62的蛋白表达水平较模型组明显升高,且清肾颗粒组上述指标的变化优于3-MA组〔BUN(mmol/L):8.02±0.97比9.45±1.32,SCr(μmol/L):80.73±9.53比91.35±10.76,JAK2(A值):0.91±0.09比1.12±0.09,STAT3(A值):1.14±0.18比1.43±0.22,LC3-Ⅱ(A值):1.87±0.79比2.28±0.91,Beclin-1(A值):3.24±0.93比3.82±0.98,NLRP3(A值):2.87±0.75比3.03±0.78,α-SMA(A值):2.01±0.27比2.35±0.30,C-Ⅳ(A值):2.93±0.51比3.25±0.43,P62(A值):2.25±0.67比1.98±0.65,均P<0.01〕.结论 清肾颗粒可以通过抑制JAK2/STAT3信号通路,改善肾组织的自噬水平,减轻肾组织的炎症反应,从而改善5/6肾切除模型大鼠的RIF.