TRPC家族在TGF-β1诱导足细胞钙离子内流中的表达及作用

瞬时受体电位阳离子通道蛋白(transient receptor potential cation channel,TRPC)是哺乳动物重要的阳离子通道蛋白,参与细胞多种生理和病理过程.本研究组前期研究发现转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)可提高肾小球足细胞TRPC6的表达,为进一步明确TRPC家族其他成员在足细胞损伤中的作用,本研究探讨TGF-β1对足细胞TRPC家族表达的影响以及TRPC家族在TGF-β1诱导足细胞内钙离子浓度变化中的作用.体外培养条件永生化肾小球足细胞株MPC5,通过TGF-β1构建足细胞损伤模型,qRT-PCR和Western blot法检测TGF-β1干预对足细胞TRPC家族mRNA和蛋白表达水平的影响.通过基因干扰siRNA技术和药理学方法分别抑制TRPC家族表达后,荧光探针Fluo-3/AM静态检测足细胞游离钙水平,动态高速钙离子成像系统检测足细胞内钙离子浓度动态变化.结果显示,与正常对照组相比,TGF-β1可使足细胞TRPC1/3/6蛋白表达增多,对TRPC4蛋白表达无影响,对TRPC5/7蛋白表达分别只在4ng/mL和8ng/mL时有显著影响.TGF-β1可使足细胞TRPC1/3/6 mRNA表达增多,对TRPC4/5/7 mRNA表达无明显影响.TGF-β1干预可显著提高足细胞内钙离子浓度,TRPC1/4/5/7低表达对TGF-β1干预下足细胞内钙离子浓度无明显影响,TRPC3/6低表达可降低TGF-β1干预下足细胞内钙离子浓度.TRPC6低表达组足细胞内钙离子浓度与SKF96365(TRPC通道广泛抑制剂)组相当,TRPC3低表达组钙离子浓度高于SKF96365组.以上结果提示,TGF-β1可使足细胞TRPC1/3/6表达升高,TGF-β1提高足细胞内钙离子浓度与TRPC3/6有关,TRPC6对足细胞内钙离子浓度的影响程度可能大于TRPC3.