鼠伤寒沙门菌伴侣蛋白Hfq与小RNA GcvB结合位点的初步分析

旨在探究Hfq与GcvB可能的作用结合位点,本研究首先筛查GcvB中Hfq结合偏好型富U基序.通过λ-Red同源重组酶系统构建GcvB富U基序突变或截短菌株,构建GcvB终止子茎延伸菌株.运用P22噬菌体转导技术构建相应的hfq基因缺失菌株以及.ppA::lacZ基因融合菌株.通过qRT-PCR检测重组菌株的gcvB基因转录水平,β-半乳糖苷酶试验检测oppA基因编码蛋白水平.预测结果显示,GcvB存在2个Hfq结合偏好型富U基序U5和U8.qRT-PCR结果显示,U5基序的突变未造成gcvB基因转录水平明显的变化,而gcvB基因转录水平随U8基序的截短而下调,截短为U5和U4时下调最为明显,分别下调40.5％和37.5％.延伸U4截短菌株的GcvB终止子茎,结果发现,gcvB基因转录水平几乎恢复到了对照组的水平,同时也发现,尽管U4截短菌株gcvB基因转录水平得以恢复,却丧失了 Hfq协同GcvB转录后负调控.ppA mRNA的能力.以上结果表明,U5基序与Hfq维持GcvB稳定性无明显关联.U8基序对Hfq协助GcvB转录后负调控oppA mRNA以及维持GcvB稳定性是重要的,推测其为Hfq与GcvB的作用结合位点.