环状RNA ciRS-7 靶向 miR-219a-5p影响微小隐孢子虫体外增殖的机制

旨在探究环状RNA ciRS-7靶向miR-219a-5p影响微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)在HCT-8细胞中增殖的作用机制.以C.parvum感染HCT-8细胞为研究模型,利用Western blot检测HCT-8细胞中的自噬蛋白LC3B-Ⅱ和p62的表达情况;利用qRT-PCR和双荧光素酶报告基因试验检测和验证ciRS-7与miR-219a-5p的靶向关系,利用qRT-PCR检测HCT-8细胞中C.parvum的荷虫量(C.parvum hsp70基因的mRNA水平).结果显示:C.parvum感染诱导HCT-8细胞中LC3B-Ⅱ和p62的蛋白质表达水平在感染后8、12、24、36和48 h显著上调;过表达ciRS-7显著抑制了 C.parvum感染细胞中LC3B-Ⅱ的蛋白质表达水平,但升高了 p62的蛋白质表达水平,而干扰ciRS-7表达的作用相反;C.parvumm感染诱导HCT-8细胞中miR-219a-5p的显著下调表达,且ciRS-7可靶向调节miR-219a-5p的表达;miR-219a-5p mimics显著增加了 C.parvum感染细胞中LC3B-Ⅱ的蛋白质表达水平,但降低了 p62的蛋白质表达水平,而miR-219a-5p inhibitor的作用相反;miR-219a-5p mimics可逆转过表达ciRS-7对C.parvum感染细胞中LC3B-Ⅱ蛋白质表达的抑制和p62蛋白质表达的促进作用;miR-219a-5p mimics显著抑制了感染细胞中C.parvumhsp70基因的mRNA表达水平,而miR-219a-5p inhibitor的作用相反;miR-219a-5p mimics逆转了过表达ciRS-7对感染细胞中C.parvum hsp70基因的mRNA表达水平的上调作用.ciRS-7通过靶向miR-219a-5p抑制C.parvum 感染诱发的HCT-8细胞自噬,进而促进C.parvum在HCT-8细胞中的增殖.