H3N2禽流感病毒反向遗传操作平台的建立

近几年,禽流感病毒(AIV)跨越禽-犬屏障产生新型H3N2犬流感病毒,后者在亚洲多国的犬中广泛流行,造成潜在的公共卫生安全威胁.尽管如此,H3N2AIV如何跨宿主传播至犬的分子机制尚不清楚.为此,本研究利用早期筛选到的一株不感染犬和鼠,但感染禽的H3N2禽流感病毒A/Duck/Shanghai/01/2009(H3N2)(简称为SH01),通过RT-PCR技术扩增了病毒的8个全基因片段,并分别克隆至PLLB双向表达载体上.将构建成功的8个质粒纯化后共转染293T细胞,转染48 h后加入TPCK胰酶作用2h,将上清液和细胞一同接种9～11日龄SPF鸡胚,检测其血凝效价.经测序分析,确定获救病毒的8个基因片段序列与亲本毒株的序列完全一致,表明该病毒拯救成功.H3N2禽流感病毒反向遗传操作平台的成功建立为探索该病毒跨宿主传播犬的分子机制提供了工具.