神经细胞黏附分子衍生肽P2对缺血性脑卒中大鼠神经功能损伤的修复作用及机制

目的:探讨神经细胞黏附分子(neural cell adhesion molecule，NCAM)衍生肽P2对缺血性脑卒中大鼠神经功能损伤的修复作用及机制。方法:提取并培养原代皮质神经元，氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation，OGD)造模后采用CCK-8法观察不同浓度P2对OGD条件下皮质神经元活性的影响，Western blot检测凋亡相关蛋白及细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal regulated kinase 1/2，Erk1/2)的表达。选取清洁级雄性SD大鼠进行动物实验，采用大脑中动脉线栓法(middle cerebral artery occlusion，MCAO)建立大鼠脑卒中缺血/再灌注损伤动物模型，造模成功的大鼠按照随机数字表法分为假手术组、MCAO组和MCAO+P2组，每组12只。术后MCAO+P2组大鼠每日一次皮下注射1 mg/kg P2，持续至术后14 d，其余两组大鼠均皮下注射等体积0.9%氯化钠溶液。平衡木实验观察大鼠运动功能损伤及恢复情况。免疫荧光染色检测大鼠脑梗死灶周边的神经元凋亡比率，Western blot检测大鼠脑梗死灶周边脑组织内Erk1/2蛋白的表达。采用SPSS 22. 0进行统计分析，平衡木实验数据采用重复测量方差分析，其他实验数据以单因素方差分析进行检验。结果:与OGD组相比，0.5，1.0和2.0 μmol/L的P2均可以提高OGD条件下神经元细胞活性，其中1 μmol/L的P2效果最好(2.436±0.284，1.551±0.410， P<0.05)。Western blot结果显示，加入1 μmol/L P2后凋亡相关蛋白bax [(76.120±3.232)%，(88.965±5.208)%， P<0.05]、cleaved caspase-3[(76.736±4.306)%，(97.781±8.111)%， P<0.05]和cleaved caspase-9[(88.833±6.581)%，(104.962±4.788)%， P<0.05]表达均低于OGD组，bcl-2[(56.146±3.882)%，(43.170±6.945)%， P<0.05]以及磷酸化Erk1/2蛋白[(73.583±8.557)%，(55.219±4.615)%， P<0.05]表达均高于OGD组。与MCAO组相比，P2干预后第14天时大鼠瘫痪侧后肢的滑脱率低[(23.438±11.540)%，(41.733±13.631)%， P<0.05]，病灶周边神经元凋亡比率低[(13.144±6.485)%，(26. 699±6. 402)%， P<0.05]，大鼠梗死灶周边脑组织内磷酸化Erk1/2蛋白表达高[(74.062±7.458)%，(53. 327±7.093)%， P<0.05]。 结论:低浓度NCAM衍生肽P2可对OGD条件下的神经元以及缺血性脑卒中大鼠发挥神经保护作用，其作用机制可能与Erk信号通路的活化有关。