HAPLN3基因在肾透明细胞癌中的表达及其与预后、免疫的关系

目的 探讨透明质酸和蛋白多糖链接蛋白家族基因成员3(HAPLN3)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达及其与预后、免疫的关系.方法 利用多个公共数据库分析HAPLN3在ccRCC中的差异表达、预后价值,以及与肿瘤微环境、免疫细胞浸润、免疫检查点及免疫检查点阻断反应评分(TIDE)等的相关性,并行富集分析HAPLN3在ccRCC中的潜在作用机制.通过免疫组织化学法检测HAPLN3蛋白在癌组织和癌旁组织中的表达,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting检测ccRCC细胞株(OS-RC-2、ACHN)HAPLN3 mRNA和蛋白的表达.细胞转染siRNA沉默HAPLN3,用qRT-PCR检测不同ccRCC细胞株中HAPLN3基因沉默的有效性.采用CCK-8法检测HAPLN3基因表达降低对不同ccRCC细胞株增殖的影响.结果 生物信息学分析结果表明,ccRCC中HAPLN3 mRNA相对表达量高于正常肾脏组织(P<0.05),在不同WHO/ISUP分级的ccRCC中发现G4组HAPLN3 mRNA相对表达量高于G3组(P<0.05).生存分析结果表明,HAPLN3高表达组总体生存率(OS)低于低表达组(P<0.05),且G4组OS也低于G3组(P<0.05).单因素Cox回归分析结果表明,HAPLN3高表达[HR=1.548(95％CI:1.325,1.801)]、高龄[HR=1.029(95％CI:1.016,1.042)]、高pT分期[HR=1.923(95％CI:1.632,2.265)]、高pN分期[HR=3.425(95％CI:1.818,6.456)]、高pTNM分期[HR=1.867(95％CI:1.638,12.12)]、高Grade分级[HR=2.291(95％CI:1.870,2.806)]是ccRCC患者不良预后的影响因素(P<0.05);多因素Cox回归分析结果表明,HAPLN3高表达[HR=1.430(95％CI:1.144,1.789)]、高龄[HR=1.006(95％CI:1.006,1.043)]、高pTNM分期[HR=1.661(95％CI:1.205,2.289)]、高Grade分级[HR=1.486(95％CI:1.070,2.065)]是ccRCC患者不良预后的独立影响因素(P<0.05).HAPLN3 mRNA相对表达量与B淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞浸润呈正相关(rs=0.284、0.532、0.584、0.617、0.323和0.620,均P=0.000).G4组CTLA4、LAG3、PDCD1、TIGIT mRNA相对表达量和TIDE评分高于G3组(P<0.05).GESA富集分析结果表明,HAPLN3在ccRCC中与多条免疫及肿瘤通路相关.癌组织HAPLN3阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05).OSRC-2、ACHN细胞HAPLN3 mRNA和蛋白相对表达量高于HK-2细胞(P<0.05).si-NC组、si-HAPLN3组不同时间点OS-RC-2、ACHN细胞的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果:①不同时间点OS-RC-2、ACHN细胞的OD值有差异(F=481.158和292.321,均P=0.000);②两组OS-RC-2、ACHN细胞的OD值有差异(F=27.471和255.219,均P=0.002);③两组OS-RC-2、ACHN细胞的OD值变化趋势有差异(F=20.799和11.301,P=0.017和0.040).结论 HAPLN3在ccRCC中表达上调,并与肿瘤细胞增殖相关,可能是ccRCC患者的独立预后标志物,并有作为免疫治疗靶点的潜在价值.