慢性应激对肠道屏障及结直肠癌肝转移的影响

目的 探讨慢性应激对肠道屏障的影响及其在结直肠癌肝转移中的作用.方法 32只C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为空白对照组(CON)、慢性应激组(CS)、结直肠癌肝转移组(CRCLM)、慢性应激+结直肠癌肝转移组(CS+CRCLM),各8只.适应性饲养1周后,CS、CS+CRCLM组小鼠持续28 d每日束缚于有孔离心管内6 h建立应激模型.在应激第11天,CRCLM、CS+CRCLM组小鼠经脾注射MC38细胞建立肝转移模型.观察慢性应激对结直肠癌细胞向肝脏转移的影响;光镜下观察小鼠肠道组织形态改变;采用免疫组织化学法检测小鼠肠道屏障相关蛋白ZO-1、claudin-1的表达和小鼠肝脏枯否细胞(kupffer cell,KC)数量及分布;16S rDNA测序技术测定小鼠肠道菌群的表达;ELISA法测定小鼠肝脏IL-6、TGF-β和VEGF水平.结果 CS+CRCLM组的肝转移瘤数目为(155.00±31.96)个,明显多于CRCLM组的(36.20±4.15)个,t=12.850,P=0.006.相较于CON组,CS组小鼠肠绒毛变短并伴有少量炎性细胞浸润,CS+CRCLM组小鼠肠道黏膜形态学改变最显著.CON组、CS组、CRCLM组和CS+CRCLM组小鼠肠黏膜评分分别为0.12±0.13、1.24±0.26、1.50±0.27和2.38±0.43,F=96.759,P<0.001.而4组小鼠肠道组织中ZO-1及clau-din-1的表达差异均无统计学意义,F值分别为0.962和0.723,P值分别为0.427和0.549.CS组拟杆菌属(0.070±0.038)、理研菌科RC9肠道群(0.028±0.016)及Odoribacter(0.022±0.007)的丰度均高于CON组(0.046±0.003、0.003±0.001和0.005±0.003),均P<0.05;与CRCLM组(0.018±0.012、0.007±0.006和0.013±0.011)相比,CS+CRCLM组拟杆菌属(0.059±0.005)、理研菌科RC9肠道群(0.032±0.026)及Odoribacter(0.034±0.021)的丰度也明显升高,均P<0.05.肝内KC主要分布于肝血窦及肝小叶汇管区,CS+CRCLM组肝内KC分布明显多于CON组、CS组和CRCLM组,均P<0.01.4组小鼠肝脏组织中IL-6(F=8.128,P=0.001)、TGF-β浓度(F=3.670,P=0.027)差异均有统计学意义;两两比较显示,CS+CRCLM组IL-6浓度均低于其余各组,TGF-β浓度均高于其余各组,均P<0.05.4组小鼠肝脏组织中VEGF浓度差异无统计学意义,F=1.232,P=0.321.结论 慢性应激可能通过介导肠道菌群紊乱及肠道屏障破坏,诱导肝内免疫微环境的改变,从而导致结直肠癌肝转移的发生.