痹痿同治法对脂多糖诱导大鼠退变软骨细胞炎症和凋亡的影响

目的 探讨痹痿同治法方药化湿定痛汤合龟鹿二仙胶对骨关节炎的可能作用机制.方法 制备化湿定痛汤合龟鹿二仙胶含药血清及空白血清.采用4周龄SD大鼠膝关节软骨建立稳定的软骨细胞体外培养体系,采用免疫组化染色法对F2代软骨细胞进行鉴定.鉴定成功后分别用4个体积分数的含药血清(5％、10％、15％、20％)和空白血清处理软骨细胞(5×103个/孔),培养24、48、72 h后,CCK-8法检测软骨细胞活性,选择提升软骨细胞活性的最佳含药血清体积分数进行后续实验.用10 mg/L脂多糖诱导F2代软骨细胞,复制退变软骨细胞模型,将细胞分为空白组、模型组、化湿定痛汤合龟鹿二仙胶含药血清组(简称"含药血清组").干预24 h后,采用CCK-8法检测各组软骨细胞活性,ELISA法检测各组细胞培养液上清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,qRT-PCR法检测各组软骨细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA的表达,Western blotting检测各组软骨细胞Bcl-2、Bax、切割型Caspase-3蛋白的表达情况.结果 与空白组比较,模型组软骨细胞活性降低(P<0.01),细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平升高(P<0.01),Bax、Caspase-3 mRNA的表达及Bax、切割型Caspase-3蛋白的表达上调(P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白的表达下调(P<0.01).与模型组比较,含药血清组软骨细胞活性升高(P<0.05),细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平下降(P<0.05),Bax、Caspase-3 mRNA的表达及Bax、切割型Caspase-3蛋白的表达下调(P<0.05),Bcl-2 mRNA和蛋白的表达上调(P<0.05).结论 痹痿同治法能改善软骨细胞生存的炎症微环境,提升软骨细胞活性,改善软骨细胞凋亡情况,进而发挥对大鼠退变软骨细胞的保护作用,延缓骨关节炎发病进程.