腺病毒介导人VEGF 165 和ANG-1双基因转染大鼠BMSCs及对其增殖的影响

[目的]探讨携带人血管内皮细胞生长因子165（VEGF165）和血管生成素-1（ANG-1）双基因的腺病毒表达载体pAd-VIA转染大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）的体外表达及对BMSCs增殖的影响。[方法]将本室构建的编码人VEGF165和ANG-1双基因的腺病毒质粒pAd-VIA在QBI-293A细胞内进行包装和扩增,体外转染大鼠BMSCs,通过绿色荧光蛋白（GFP）表达、Western-blotting、酶联免疫吸附分析（ELISA）方法检测外源基因的表达,利用MTT法检测MOI（multiplicity of infection）=50、100、200、400 pfu/cell不同浓度腺病毒转染后对BMSCs增殖活性的影响。[结果]重组腺病毒质粒pAd-VIA在QBI-293A细胞内成功包装和扩增,体外转染BMSCs后,有大量的GFP表达,Western-blotting检测显示,转染组与VEGF165和ANG-1抗体结合,在45 KD和14.4 KD左右出现印迹条带;ELISA结果显示:转染组第1、2、3 d,上清中的VEGF165浓度和ANG-1浓度持续增加,未转染组均未检测到外源基因的表达,差异有统计学意义（P＜0.01）;不同浓度的腺病毒载体转染BMSCs后,促进细胞增殖,细胞生长曲线上移,在1、3、5、7 d转染组的OD值均大于未转染组,差异有统计学意义（P＜0.01）,第9 d,细胞进入平台期,转染组和未转染组的OD值差异无统计学意义（P＞0.05）。[结论]重组腺病毒pAd-VIA转染大鼠BMSCs后,外源基因在体外得到有效表达,同时在观察时间内可以促进大鼠BMSCs的增殖。