枸杞多糖调控AMPK/Sirt自噬途径延缓D-gal诱导的卵巢早衰的机制研究

从5'-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(5'-adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)/沉默信息调节因子1(si-lent information regulator 1,Sirt1)信号通路,探讨枸杞多糖缓解小鼠卵巢早衰(POF)的分子机制.采用背部注射D-半乳糖(D-gal)法建立POF小鼠模型,实验设置正常对照组、模型组、枸杞多糖组、3-MA组(自噬抑制剂3-甲基腺嘌吟)、AMPK抑制剂组、枸杞多糖+AMPK抑制剂组,每组15只,各组连续给药28 d后;酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清性激素[雌二醇(estradiol,E2)、黄体生成激素(luteinizing hormone,LH)、卵泡刺激素(follicle-stimulating hor-mone,FSH)]水平;检测卵巢质量系数;SA-B-Gal苷酶染色观察卵巢衰老状态;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察卵巢形态变化;免疫组化法检测自噬标记物-LC3-Ⅱ在卵巢组织中表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测衰老标记因子-p16INK4a、自噬标记物LC3-Ⅱ、Beclin-1、自噬底物p62、溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)、自噬调控通路AMPK/Sirt1/雷帕霉素靶蛋白复合体1(mTORC1)/Unc-51样激酶1 Ser757位点(Ulk1 Ser757)蛋白表达.与正常对照组相比,模型组小鼠卵巢颗粒细胞及各级卵泡减少严重,卵巢组织衰老及性激素分泌紊乱严重,卵巢自噬活性减弱,AMPK/Sirt1自噬途径蛋白表达降低(P＜0.05).枸杞多糖干预治疗后,小鼠卵巢颗粒细胞及各级卵泡减少、衰老及性激素紊乱现象减轻,自噬活性升高,AMPK/Sirt1自噬途径活化(P＜0.05).3-MA及AMPK抑制剂干预治疗,均可抑制自噬,加重小鼠卵巢损伤及衰老,AMPK抑制剂可部分减弱枸杞多糖发挥的促进自噬活化、抗衰老及改善卵巢组织损伤作用(P＜0.05).枸杞多糖可通过促进AMPK/Sirt1自噬途径活化,来缓解D-gal诱导的POF症状.