微RNA-99b靶向调节mTOR基因表达可逆转人乳腺癌细胞对多柔比星的耐药性

目的:探讨微RNA-99b（microRNA-99b,miR-99b）通过靶向调节哺乳动物雷帕霉素靶分子（mammalian target of rapamycin,mTOR）基因的表达,在人乳腺癌细胞对多柔比星（doxorubicin,DOX）耐药过程中的作用及其可能的分子机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测miR-99b在亲本敏感细胞株MCF-7/S和DOX耐药细胞株MCF-7/DOX中的表达水平。应用生物信息学软件预测miR-99b的潜在靶基因,选取mTOR作为研究靶基因。将miR-99b模拟物和miR-99b抑制子分别转染MCF-7/S和MCF-7/DOX细胞（以转染阴性对照序列作为阴性对照组）,然后采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测备组细胞中miR-99b和mTOR的表达变化,并采用MTT法和FCM法分别检测miR-99b抑制表达或过表达后MCF-7/S和MCF-7/DOX细胞对DOX的敏感性以及细胞凋亡变化。同时,MTT法检测mTOR抑制剂雷帕霉素处理后MCF-7/DOX细胞对DOX的敏感性变化。结果:耐药细胞MCF-7/DOX中miR-99b的相对表达水平比敏感细胞MCF-7/S明显降低（P＜0.001）。与阴性对照组或未转染对照组相比,miR-99b模拟物转染MCF-7/DOX细胞后,miR-99b的相对表达水平明显升高（P＜0.001）,DOX对细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC 50 )明显降低（P＜0.001）,细胞凋亡率明显升高（P＜0.01）,而且mTOR的mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P＜0.01,P＜0.001）。当MCF-7/S细胞转染miR-99b抑制子后,miR-99b的相对表达水平比阴性对照组明显降低（P＜0.05）,DOX的IC 50 值明显升高（P＜0.001）,mTOR的mRNA和蛋白表达水平明显升高（P值均＜0.001）,而细胞凋亡率比未转染对照组明显降低（P=0.001）。在MCF-7/DOX细胞中分别加入100、400和1 600 nmol/L的mTOR抑制剂雷帕霉素处理后,DOX对细胞的IC 50 值均明显降低（P值均＜0.001）。结论:miR-99b可以靶向下调mTOR基因的表达,从而增加人乳腺癌细胞对DOX作用的敏感性。