八肋游仆虫中心蛋白的DNA结合性质与切割活性

为了探究中心蛋白在核苷酸切除修复识别中的可能作用,选择八肋游仆虫中心蛋白(EoCen)作为研究对象,采用荧光光谱,圆二色光谱,等温滴定量热(ITC)以及电泳等方法研究了EoCen与DNA之间的相互作用.结果表明,在室温下pH为7.4的10 mmol·L-1 N-2-羟乙基哌嗪-N'-乙磺酸(hepes)缓冲溶液中,EoCen与DNA的结合导致EoCen二级结构发生改变,α-helix含量减小,DNA双螺旋结构发生微扰.同时DNA的结合会抑制EoCen的聚集.荧光光谱与ITC分析发现,EoCen与DNA以化学计量比1∶1结合形成配合物,结合常数约为104 L·mol-1.琼脂糖凝胶电泳分析表明EoCen具有切割活性,能够将超螺旋质粒DNA首先切成缺口型,最后变成线型.