中草药复方制剂对副溶血弧菌致南美白对虾肝胰腺坏死的保护作用

为了研究中药复方制剂三黄连合剂、柴茵护肝合剂、辣蓼黄酮提取物对副溶血弧菌致肝胰腺损伤的南美白对虾的保护作用,试验先测定副溶血弧菌临床分离株HJ05感染南美白对虾的半数致死浓度(LC50);然后利用该浓度感染南美白对虾,观察南美白对虾的临床症状、检测肝胰腺生化指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、碱性磷酸酶(AKP)、总超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)]和组织病理变化,建立南美白对虾肝胰腺坏死综合征(HPNS)模型;最后将249尾南美白对虾随机分为8组,分别为对照组、模型组、三黄连合剂药物组、三黄连合剂预防组、柴茵护肝合剂药物组、柴茵护肝合剂预防组、辣蓼黄酮药物组、辣蓼黄酮预防组,分析3种中药制剂对患HPNS南美白对虾死亡率和组织病理损伤的影响,利用荧光定量PCR技术研究3种中草药制剂对患HPNS南美白对虾免疫相关因子[酚氧化酶(po)、β-1,3-葡聚糖结合蛋白(lgbp)和过氧化物酶(pe)基因]表达量的影响.结果表明:HJ05株副溶血弧菌48 h的LC50是4.79×105 cfu/mL,南美白对虾感染HJ05株副溶血弧菌后食欲减退,采食量下降,肝胰腺轮廓不清晰,肝胰腺上皮细胞坏死脱落,腺管萎缩塌陷;肝胰腺ALT、GSH-Px 活性显著低于对照组(P＜0.05),AKP和SOD活性极显著低于对照组(P＜0.01),ACP活性显著高于对照组(P＜0.05).感染前15 d饲喂三黄连合剂、柴茵护肝合剂、辣蓼黄酮提取物可明显降低HPNS对虾死亡数量,缓解肝胰腺的组织病理损伤,48 h的保护率分别是48.95％、68.90％、76.67％;三黄连合剂、柴茵护肝合剂、辣蓼黄酮药物组南美白对虾肝胰腺免疫相关因子po、lgbp和pe基因mRNA相对表达量均显著或极显著高于对照组(P＜0.05或P＜0.01),三黄连合剂预防组lgbp和pe基因mRNA相对表达量显著或极显著高于模型组(P＜0.05或P＜0.01),柴茵护肝合剂预防组lgbp和po基因mRNA相对表达量极显著高于模型组(P＜0.01),辣蓼黄酮预防组po基因mRNA相对表达量极显著高于模型组(P＜0.01).说明HJ05株副溶血弧菌感染南美白对虾可诱发南美白对虾HPNS;三黄连合剂、柴茵护肝合剂、辣蓼黄酮提取物可提高机体非特异性免疫,且对HJ05株副溶血弧菌感染所致肝胰腺损伤的南美白对虾有较好的保护作用,其中辣蓼黄酮提取物的保护效果最好;推测3种中草药制剂可能是通过提高南美白对虾肝胰腺相关免疫因子的表达和抑制副溶血弧菌生长以抵抗副溶血弧菌感染.